转染试剂的那些事儿

时间: 2020-03-18 来源: 蚂蚁淘 阅读 (150)

转染技术新宠-阳离子聚合物基因转染技术

适用宿主广泛,操作简便,细胞毒性小,转染率高。其中聚乙烯亚胺(PEI)的转染性能最好。聚乙烯亚胺是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,每相隔两个碳原子,就是第三个原子都是质子化的氨基氮原子,使得聚合物网络在任何PH下都能充当有效的“质子海绵”体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞,其效果好于脂质聚酰胺,而且细胞毒性低。大量实验证明,PEI是非常有希望的基因治疗载体。目前在设计更复杂的基因载体时,PEI经常做为核心组成成分。

线性聚乙烯亚胺(Line PEI)转染复合物的细胞毒性低,有利于细胞定位,而且转染率极高。

Polyscience公司的两款明星产品线性聚乙烯亚胺(23966-1和24765-1)近年来越来越多的受到研究者们的青睐。其产品被运用到大量的转染实验中,也出现在大量的文献中。

Polyscience公司成立于1961年,总部位于宾夕法尼亚州沃灵顿,是一家生产研发化学产品的公司。该公司的产品种类已经累计超过3000种,其产品的特点是体积小,附加值高。

公司产品主要包含:

1、  单体和聚合物

2、  微球和粒子(有机、无机、可生物降解、磁珠、荧光素、染料、特异性抗体和蛋白包被颗粒,直径从40nm到10mm)用于核酸提取、蛋白分离和纯化等。

3、  高性能粘合剂、涂料和密封剂

23966-1

Polyethylenimine,Linear,MW25000

Transfection Grade (PEI 25K)

24765-1(更高效的PEI聚乙烯亚胺聚合物转染试剂

PEIMAX-Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride

(MW 40000)

PolyethylenimineHClMAX,Linear,Mw40000(PEI40000)是热卖产品线性化聚乙烯亚胺PEI25000的升级产品,不同之处在于1)完全水解(去乙酰化);2)PEI25000的盐酸盐形式,具更高的水溶特性;3)含更长连续性乙烯亚胺(ethyleneimine)片段,其质子化氮水平比PEI25000提高11%以上。本品经碱中和后,可转化为线性化自由胺(PEI),此时分子量正相当于25000。

ThomasM,etal(2005)研究数据表明,去乙酰化的PEI40000(PolyethylenimineMAX40000)体外质粒DNA转染效率提高21倍,小鼠体内靶向效率达到10,000倍,随之肺部特异疗效显示增强1500倍。


使用方法(仅供参考)

1. Pour ~450 mL of Milli-Q H2O into a 500-mL glass beaker.

2. Add 500 mg of PEI to the beaker with stirring.

3. Add concentrated HCl drop-wise to the solution to pH <2.0.

4. Stir until the PEI is dissolved (~2-3 h). Maintain the pH <2.0 throughout.

Approximately 800 μL of 12 M HCl will be required for full PEI dissolution. There may still be some small fiber particles that will not dissolve.

5. Add concentrated NaOH drop-wise to the solution to pH 7.0.

Approximately 500 μL of 10 M NaOH will be required to neutralize the PEI solution.

6. Pour the solution into a 500-mL glass cylinder. Adjust the final volume to 500 mL with Milli-Q H2O.

7. Filter-sterilize the solution through a 0.22-μm membrane.

8. Store aliquots of the desired volume at -20°C.


苏州蚂蚁淘生物科技有限公司

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