Jackson/Normal Rabbit Serum/2.0 ml/011-000-001

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概 述
  • 商品编号
    011-000-001
  • 品牌
  • 库存
    缺货
  • Host
    Rabbit
  • Conjugate
    Unconjugated
  • Unit
    2.0 ml
  • Product
  • 产地
    美国
性能
应用
靶标
图片
Normal serums are lipid extracted to improve clarity, dialyzed against phosphate buffered saline (PBS) containing sodium azide, and freeze dried. Normal serum diluted to 5% (v/v) in PBS is strongly recommended as a blocking reagent to reduce background from non-specific, conserved sequence and/or Fc receptor binding. Best results are obtained with diluted normal serum from the same host as the labeled antibody, as a separate incubation step before addition of the primary antibody.
Physical State: Freeze-dried solid
Storage: Store freeze-dried powder at 2-8°C. When ready to use, rehydrate with indicated volume of d. water and centrifuge if not clear. Product is stable for about 6 weeks at 2-8°C as an undiluted liquid. Prepare working dilution fresh each day. For extended storage after rehydration, aliquot and freeze undiluted product at -20°C or below. Avoid repeated freezing and thawing.
Expiration date: one year from date of rehydration. However, the expiration date may be extended if the product is stored according to the recommendation and the test results are acceptable for its intended use.
Preservative:0.05% Sodium Azide

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  • 1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时. 2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟 3.PBS洗净:3min*3 4.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS 5.PBS洗净:2*5min 6.羊血清封闭:37度,20分...   显示更多
    1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时. 2.-20度甲醇固定20分钟后,自然、干燥 10分钟 3.PBS洗净:3min*3 4.1%Triton:25min-30min.配成50ultriton+5mlpBS 5.PBS洗净:2*5min 6.羊血清封闭:37度,20分钟 7.一抗,4度过夜,一般要大于18小时或者37度 1-2小时 8.4度 PBS洗净,3min*5次 9.二抗 37度小于一小时   收起
    斗士小姐 2018-02-18
  • slxb2046 2018-02-07
    这个就看你的技术实力了.有些商品化的产品保质期9个月.实验最长可以放一年.那个应该是加了一些稳定剂的.如果你自己用,所用的配方什么的都是书本上的,而且封闭后将孔封好,估计可以放上一个月左右.并且不同的方法,包被的蛋白不一样,稳定性也不一样.抗体相对来说会更稳定些.如果是一些虽的蛋白,那就难说,一个月...   显示更多
    这个就看你的技术实力了.有些商品化的产品保质期9个月.实验最长可以放一年.那个应该是加了一些稳定剂的.如果你自己用,所用的配方什么的都是书本上的,而且封闭后将孔封好,估计可以放上一个月左右.并且不同的方法,包被的蛋白不一样,稳定性也不一样.抗体相对来说会更稳定些.如果是一些虽的蛋白,那就难说,一个月都不一定   收起
    百浩生物 2018-02-16
  • 牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种白蛋白在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性。牛血清白蛋白(BSA)用途:1、 在酶切反应缓冲液中加入B...   显示更多
    牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种白蛋白在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性。牛血清白蛋白(BSA)用途:1、 在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,减轻不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性的。2 、ELISA中也常常用到,比如封闭液,样本稀释液,酶结合物稀释液都可以用BSA。3、生化研究,遗传工程和药物研究。胎牛血清(fbs)是一种性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清(FBS)的作用:1、提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。2、提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。3、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。5、起酸碱度缓冲液作用。6、提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。展开   收起
    芥末网 2018-02-09
  • 我们做的是:5%猪血清(顺便说一下,有时是不可以用牛血清封闭的,比如用bsa免疫的动物血清的检测)in PBST,37度一个小时即可。实验室整个就是这样做的,没有出现什么问题。本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。
    南京金益柏 2018-02-08
  • ELISA所用的包被抗原一般是蛋白质,促使蛋白质同板基质结合的力一般是疏水作用。不同的蛋白因其疏水性不同而有不同的结合常数。由于一般的蛋白其亲水基团都在ELISA的原理和类型1. ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活...   显示更多
    ELISA所用的包被抗原一般是蛋白质,促使蛋白质同板基质结合的力一般是疏水作用。不同的蛋白因其疏水性不同而有不同的结合常数。由于一般的蛋白其亲水基团都在ELISA的原理和类型1. ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记.结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性.在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应.用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开.再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上.此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例.加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析.由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度.2. ELISA的类型ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体.在这种测定方法中有三个必要的试剂1)固相的抗菌素原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);(2)酶标记的抗原或抗体,称为"结合物"(conjugate);(3)酶反应的底物.根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不类型的检测方法.用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型:2.1 双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体.洗涤除去未结合的抗体及杂质.2) 加受检标本,保温反应.标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物.洗涤除去其他未结合物质.3) 加酶标抗体,保温反应.固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合.彻底洗涤未结合的酶标抗体.此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关.4) 加底物显色.固相上的酶催化底物成为有色产物.通过比色,测知标本中抗原的量.在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法.如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物.如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物.这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测.在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物".类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落.钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果.因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值.用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应.假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物.但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题.双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰.RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合.用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应.采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标(参见6.2).双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心.2.2 双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似.用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体.与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体.此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法.乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法.本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法.2.3 间接法测抗体间接法是检测抗体常用的方法.其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法(见图2-3).操作步骤如下:1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原.洗涤除去未结合的抗原及杂质.2)加稀释的受检血清,保温反应.血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物.经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体,血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去.3)加酶标抗抗体.可用酶标抗人Ig以检测总抗体,但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体.固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合,从而间接地标记上酶.洗涤后,固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关.4)加底物显色本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断.间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法.间接法成功的关键在于抗原的纯度.虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果,但应尽可能予以纯化,以提高试验的特异性.特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质,例如以E.Coli为工程酶的重组抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发生反应.抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质,例如来自人血浆或人体组织的抗原,如不将其中的Ig去除,试验中也发生假阳性反应.另外如抗原中含有无关蛋白,也会因竟争吸附而影响包被效果.间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性.病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分.IgG的吸附性很强,非特异IgG可直接吸附到固相载体上,有时也可吸附到包被抗原的表面.因此在间接法中,抗原包被后一般用无关蛋白质(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封闭(blocking)固相上的空余间隙.另外,在检测过程中标本须先行稀释(1:40~1:200),以避免过高的阴性本底影响结果的判断.2.4 竞争法测抗体当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体.其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合.标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应.如抗原为高纯度的,可直接包被固相.如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原.洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应.竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc ELISA一般采用此法.另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应.抗HBe的检测一般采用此法.2.5 竞争法测抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式.其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合.标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅.小分子激素,药物等ELISA测定多用此法.2.6 捕获包被法测抗体IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中.间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体.如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体,因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体,后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上.因此如用抗人IgM作为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理,以除去IgG的干扰.在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法.先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM).然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合.继而加酶标记针对抗原的特异性抗体.再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关.此法常用于病毒性感染的早期诊断.甲型肝炎病毒(HAV)抗体的检测模式见图2-7.类风湿因子(RF)同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反应.因此中和IgG的间接法近来颇受青睐,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功.2.7 ABS-ELISA法ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语.亲和素是一种糖蛋白,分子量60000,每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成.生物素为小分子化合物,分子量244.用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物,标记方法颇为简便.生物素与亲和素的结合具有很强的特异性,其亲和力较抗原抗体反应大得多,两者一经结合就极为稳定.由于一个亲和素可与4个生物素分子结合,因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素(LA法和桥联亲和素-生物素(ABC)法两种类型.两者均以生物素标记的抗体(或抗原)代替原ELISA系统中的酶标抗体(抗原).在LAB中,固相生物素先与不标记的亲和素反应,然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度.在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于ELISA中可使本底增高.从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点,在ELISA应用中有替代前者的趋势.由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中ABS-ELISA应用不多.   收起
    cn#GVGVkukQpL 2018-02-05
  • 细胞免疫荧光的详细操作步骤1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3,0.2%TritonX100通透10分钟,PBS洗三遍。4,与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,P...   显示更多
    细胞免疫荧光的详细操作步骤1,取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里,PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小,因此夹取的时候要小心。2,4%多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。3,0.2%TritonX100通透10分钟,PBS洗三遍。4,与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,PBS洗三遍。5.,一抗4度湿盒内过夜,也可37度2小时,感觉前者效果好,PBS洗三遍。6,二抗室温2小时,或者37度1半小时,PBS洗三遍。7,最好用DAPI染核,然后直接照荧光片。8,蒸馏水洗掉PBS,甘油封片,指甲油封片子的四周。   收起
    本回答由网友推荐 2018-02-12
  • 1、问:用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白,两者操作过程有哪些不同?参考见解:只是固定方法不同。细胞固定用甲醇,切片固定用多聚甲醛,而染色方法是一样的。2、问:近期要做免疫荧光双标,不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项?参考见解:我正在做冰冻组织切片的免疫荧光双染。我的经验是:(...   显示更多
    1、问:用免疫荧光方法做组织切片和培养细胞内的蛋白,两者操作过程有哪些不同?参考见解:只是固定方法不同。细胞固定用甲醇,切片固定用多聚甲醛,而染色方法是一样的。2、问:近期要做免疫荧光双标,不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤及其注意事项?参考见解:我正在做冰冻组织切片的免疫荧光双染。我的经验是:(1)选取一抗时要来源于两种不同的动物,我用的是来源于rabbit和rat的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti-rat-Tex-Red(红)。(2)我的做法是两种一抗(CHI抗体)同时孵育,然后两种二抗同时孵育。抗体浓度、孵育时间要仔细摸索,我感觉一抗4度孵育过夜比较好,背景比较清晰。(3)我的阳性对照用的是阳性组织切片,阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG,荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。(4)封闭血清与二抗来源动物一致,我用的是10%的正常donkey血清。(5)其余步骤同一般免疫荧光单标操作。3、问:本人拟做Brdu标记神经干细胞免疫荧光,二抗为FITC标记,想请教各位大侠:(1)抗体分装和荧光显微镜观察时是否一定要在暗室中进行?(2)封片时是否用甘油缓冲液即可,还是用甘油和0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液等量混合封片?(3)免疫酶染色中的3%过氧化氢及2N盐酸是否还需要用?参考见解:(1)你的二抗是用FITC标记的,为避免荧光分解,分装及荧光显微镜观察时均要避光;(2)封片最好用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液,后者能使玻片透明;(3)关于免疫酶染色,如果是用过氧化物酶做标记,就必须用3%H2O2以去除内源性过氧化物酶;2N盐酸需要使用,目的是使DNA变性,让Brdu抗体能够充分地与已经掺入的Brdu结合。4、问:做间接法免疫荧光染色,如何设置对照?参考见解:最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照,看是否非特异性染色。(1)空白对照:如果你做的是石蜡切片免疫组化,这个对照必须有,目的是看自发荧光,脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。(2)阴性对照:标本直接滴加二抗,呈阴性反应。(3)抗原对照:标本加同种动物的未免疫血清,以PBS冲洗后,在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体,应呈阴性反应。5、问:我做乳腺组织的免疫荧光染色,结果用激光共聚焦显微镜看很好:有阳性信号,阴性对照组也没有荧光,但是拿到荧光显微镜下看,我的阴性对照组一片绿,像非特异性染色,到底哪个结果才是真实的呢? 参考见解:激光共聚焦显微镜的分辨率比普通荧光显微镜要高的多,出现上述现象首先要排除荧光显微镜的问题,如是不是紫外灯泡寿命到期了或者别的原因,荧光显微镜没有问题,那就以共聚焦显微镜的结果为主。展开   收起
    热心网友 2018-02-08
  • 封闭不当反而会使阴性本底增高,操作时洗涤彻底,取决于 ELISA 的模式及具体的实验条件,业已起到了类似封闭剂的作用.5%的牛血清白蛋白,封闭一般是不可少的(见2,而且封闭后的载体不易长期保存,吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙 。特别是用单抗腹水直接包被时。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封...   显示更多
    封闭不当反而会使阴性本底增高,操作时洗涤彻底,取决于 ELISA 的模式及具体的实验条件,业已起到了类似封闭剂的作用.5%的牛血清白蛋白,封闭一般是不可少的(见2,而且封闭后的载体不易长期保存,吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙 。特别是用单抗腹水直接包被时。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用。 BIM试剂盒为您提供.2。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂,双抗体夹心法。抗原或抗体包被时所用的浓度较低.05%-0。包被好的E LISA 板干燥后放入密封袋或锡袋中,封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面,从而排斥在ELISA 其后的步骤中干扰物质的再吸附。但在间接法测定中; ,因此在试剂盒的制备中较少应用; ,在低温可保存数月。一般说来,其最大的特点是价廉。并非所有的ELISA 固相均需封闭,也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的,可以高浓度使用(5%)。封闭的手续与包被相类似; 。最常用的封闭剂是0,不经封闭也可得到满意的结果;封闭 (blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程,但由于奶粉的成份复杂.2)。封闭是否必要,只要酶标记物是高活性的   收起
    本回答由网友推荐 2018-02-09
  • liuhua 2018-01-30
    ELISA实验的原理似乎很简单,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,间中夹杂着洗涤和封闭。然而,即使是平淡无奇的洗涤和封闭,如果做得不太好,也有可能毁了整个实验。在实验结束时,我们是否能获得有意义的信息,这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景,下面...   显示更多
    ELISA实验的原理似乎很简单,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,间中夹杂着洗涤和封闭。然而,即使是平淡无奇的洗涤和封闭,如果做得不太好,也有可能毁了整个实验。在实验结束时,我们是否能获得有意义的信息,这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。洗涤很重要洗涤步骤看似很无聊,其实很重要,因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)残留在微孔板中,那么它会增加背景噪音。如有必要,可增加洗涤液中的盐浓度,这会阻止非特异结合反应。如果背景过高,而您怀疑洗涤不够时,可以尝试增加洗涤次数。封闭更关键封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高,怀疑封闭不充分,那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液,或适当延长封闭时间。如果您一直被背景问题所困扰,那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间,但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液:蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素,包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。好的封闭液应降低非特异性结合,但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。最常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定,在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用,因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%),它会降低特异结合,产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液,后者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同,是永久的。它们与开放位点结合并封闭,同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过,它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。抗体浓度须优化我们通常会follow师兄师姐留下来的操作步骤,但是如果试剂稍有不同,则可能需要优化抗体的量。记住,非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点,切勿使用过多的一抗或二抗。   收起
    2018-02-10
  • 不可以。透膜也好,酶消化也好,抗原热修复也好,消除内源性过氧化物酶和内源性生物素也好,都要在血清封闭之前,如果你忘记了前面的步骤,可以洗去封闭液,补上必须的程序,再封闭,不洗,吸干封闭液直接加一抗。
    玫瑰两朵半 2018-02-04